ما هو بولي أكريلاميد جل الكهربائي
Jul 29, 2024بولي أكريلاميد الفصل الكهربائي الهلامي (PAGE) هو أسلوب شائع الاستخدام في الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية والتكنولوجيا الحيوية لفصل وتحليل الجزيئات الحيوية، وخاصة البروتينات والأحماض النووية، بناءً على حجمها وشحنتها. تتضمن هذه التقنية استخدام مصفوفة هلامية مكونة من مادة بولي أكريلاميد، وهي مادة تشكل شبكة مسامية عند بلمرتها.
أثناء تحضير الجل، يتم خلط مونومرات الأكريلاميد مع عامل ربط متقاطع، عادةً ما يكون ثنائي الأكريلاميد، وبادئ البلمرة. يُسكب هذا الخليط بعد ذلك في صينية صب الهلام ويُسمح له بالبلمرة لتكوين هلام صلب. يحدد تركيز مادة الأكريلاميد نطاق حجم الجزيئات التي يمكن حلها، مع تركيزات أقل مناسبة للجزيئات الأكبر وتركيزات أعلى للجزيئات الأصغر.
بمجرد أن يتصلب الجل، يتم وضعه عموديًا في جهاز رحلان كهربائي يتكون من قطبين كهربائيين متصلين بمصدر طاقة. يتم غمر الجل في محلول منظم يوصل الكهرباء. يتم تحميل العينات التي تحتوي على الجزيئات الحيوية محل الاهتمام، والتي يتم خلطها عادة مع مخزن مؤقت للتحميل، في الآبار المصنوعة في الجل.
عند تطبيق تيار كهربائي، تهاجر الجزيئات الحيوية عبر مصفوفة الهلام. تحدث الهجرة بسبب الشحنة الكهربائية التي تحملها الجزيئات الحيوية وتفاعلها مع مصفوفة الهلام. تتحرك الجزيئات الصغيرة بسرعة أكبر عبر مسام الهلام، بينما يتم إعاقة الجزيئات الأكبر وتهاجر بشكل أبطأ.
بعد عملية الرحلان الكهربائي، يمكن صبغ الهلام بأصباغ محددة أو معالجته بالأجسام المضادة لتصور واكتشاف الجزيئات الحيوية المنفصلة. يمكن أن توفر الصورة الهلامية أو نمط النطاقات الناتج معلومات حول الحجم والشكل والوفرة النسبية للجزيئات في العينة. غالبًا ما يستخدم الباحثون PAGE لتحديد البروتينات، وتحليل مجمعات البروتين، وتقييم نقاء البروتين، وتحديد حجم شظايا الحمض النووي.